Preparación estándar:
Prepare un estándar común mezclado exactamente pesando (el magnesio ±0.01) el magnesio cerca de 10 de cada estándar de referencia del kavalactone en un frasco volumétrico 10-mL. Añada 7,0 ml de metanol y sonorícelos hasta disuelto. Diluya al volumen con metanol y mézclese.
Aviso: Alternativamente, prepare un estándar de la acción del kavain de modo semejante y utilice los factores de respuesta del kavalactone para cuantificar contra.
Diluya el estándar de la acción para crear un mínimo de una curva del estándar del cuatro-punto. Los diluciones estándar sugeridos de la acción son 1:10, 1:25, y 1:100 usando el metanol.
Aviso: Almacene los estándares en las temperaturas refrigeradas (0 - 5°C). Kavalactones degrada rápidamente después de 48 horas. La preparación de los estándares de referencia frescos antes de cada análisis se recomienda.
Aparato
· Equilibrio analítico calibrado exacto al magnesio ±0.01
· Frasco, volumétrico, clase A, tamaños clasificados
· Frascos, cromatografía con el casquillo
· Sistema de la cromatografía líquida del alto rendimiento según lo descrito en el capítulo de USP. Verifique y documente ese aparato, software, y los subsistemas cumplen los requisitos de funcionamiento para la calificación/la calificación de la operación (IQ/OQ) de la instalación.
· Filtre, 0,45 µm, nilón de Gelman Acrodisc (P/N 4426), polipropileno de Whatman Puradisc™ (gato. No. 6788-2504), vidrio de Whatman GD/X (gato. No. 6894-2504) o Sonicator equivalente
· Columna, YMCbasic, 5 µm, 4,6 x 250 milímetros (gato. No BA99S05-2546WT). Columna equivalente, YMC J'Sphere H80, 4µ, 4,6 x 250 (gato. No JH08S04-2546WT).
Reactivo
· Agua, grado de la CLAR o Nanopure
· Metanol, grado de la CLAR
· Acetonitrilo, grado de la CLAR
· Ácido fosfórico, grado el reactivo de ACS
Preparación de la muestra:
Material vegetal
Pese exactamente (± 0.1mg) el magnesio cerca de 750 del tronco, de la peladura, o del material molida finamente de la raíz.
Ponga el material en un frasco volumétrico 50-mL junto con 40 ml del metanol/del agua (70/30). Sonorice por 60 minutos en la temperatura ambiente.
Permita que el frasco se refresque a la temperatura ambiente y que diluya al volumen con el metanol/agua (70/30) y que se mezcle.
Muestra del filtro y del lugar en un frasco y un casquillo de la CLAR.
Polvo y extracto suave (goma)
Pese exactamente (magnesio del ± 0,1) el magnesio cerca de 100 del extracto en un frasco volumétrico 50-mL. (Los 100 pesos del magnesio se basan sobre un contenido del kavalactone 50-60% en el extracto.) Aviso: Homogeneice cuidadosamente el extracto antes de muestrear. Esto es lograda poniendo el extracto en un envase sumergido en un 60° - baño de agua caliente de 80° C hasta que sea de flujo libre.
Añada 40 ml de metanol y sonorícelos por 10 minutos o hasta todos los sólidos han disuelto.
Permita que el frasco se refresque a la temperatura ambiente y que diluya al volumen con metanol y que se mezcle.
Muestra del filtro y del lugar en un frasco y un casquillo de la CLAR.
Muestras del polvo
El extracto de Kava es mezclado a menudo o secado a presión de aire sobre los diversos portadores. Para probar con éxito muestras del polvo, es necesario desarrollar un paso de la preparación de la muestra que recupere los kavalactones del portador. Esto puede ser lograda primero extrayendo con metanol o agua puro.
Condiciones cromatográficas:
Columna: YMCbasic, 5 µm, 4,6 x 250 milímetros
Temperatura de la columna: 40°C
Flujo: 0,6 mL/min para YMCbasic; 1,0 mL/min para J'Sphere
Fase móvil: 0,1% ácidos fosfóricos isocratic: alcohol isopropilo: acetonitrilo (64:16: 20 v/v)
Detección: 220 nanómetro (246 nanómetro alternativamente para mejorar selectividad)
Volumen de la inyección: µL 5
Tiempo de ejecución: 30 minutos
Procedimiento:
Prepare las soluciones estándar de referencia y muestree las preparaciones según lo dirigido.
Haga una sola inyección de un espacio en blanco del solvente de extracción.
Haga la sola inyección de las preparaciones estándar.
Cree un diagrama de las linearidades de áreas máximas estándar contra concentraciones estándar.
Haga las solas inyecciones de preparaciones de la muestra.
Calcule la concentración del kavalactone en la muestra.
Conveniencia del sistema:
El coeficiente de correlación de la regresión linear debe ser ≥0.999. La resolución entre el desmethoxyyangonin y los picos del yangonin debe ser ≥1.8.
Biotecnología Co., Ltd. de la Y-hierba de Shaanxi